2018年4月4日,中国首批体外受精(in vitro fertilization,IVF)犬(又名试管婴儿犬)在北京希诺谷生物科技有限公司(以下简称希诺谷)实验室诞生,共诞下2只公犬,4只母犬,采样送南昌警犬基地检测,结果证实6只幼犬与受体母犬无血缘关系。这是我国首批IVF犬,标志着我国犬科动物辅助生殖技术(Assisted Reproductive Technology,ART)的一大进步。体外受精的发展使现代遗传方法能够更有效地应用于犬类,并用于配子拯救以保护濒临灭绝的犬科动物。
IVF幼犬合影
IVF犬的技术难点主要体现在:
1)犬卵母细胞体外成熟效率低,且用于IVF后尚无活产报道
2)犬的发情鉴定技术尚不成熟,获得体内成熟的犬卵母细胞较为困难
3)精子成功获能
4)要根据早期胚胎的发育阶段判断选择合适的受体母犬及合适的移植环境(输卵管or子宫角)
自2016年3月始,希诺谷研发团队相继攻克了犬体细胞系建立、卵母细胞供体犬的发情鉴定、成熟卵母细胞的获取、体细胞核移植、胚胎融合激活及胚胎移植等技术难题,建立了具有自主知识产权的犬体细胞克隆技术平台和犬基因编辑技术平台。在此基础上,希诺谷研发团队继续攻克难关,在短短3个月的时间内掌握犬IVF技术。
据2002年世界自然保护联盟(International Union for Conservation of Nature,IUCN)的公布数据显示,犬科动物有36种,正式列为濒危物种的有9种。ART对于犬的繁育至关重要,犬的ART在通过基因编辑技术保存濒危犬科动物以及治疗遗传病方面发挥关键作用。包括人类在内的许多哺乳动物都可以通过一定的途径在体外获得胚胎及后代,但犬与其他哺乳动物不同,由于其特殊的生殖生理学特点,很难获得体内成熟的卵母细胞,且之前研究曾使用了体外培养至成熟的卵母细胞,但体外成熟效率较低、卵母细胞发育能力较差,这些都极大的限制了犬IVF技术的发展。直到2015年,美国科学家Nagashima等利用手术冲卵的方式获得体内成熟的犬卵母细胞进行IVF,共移植19枚冷冻复苏后胚胎获得7只健康幼犬,这是犬体外受精的第一批活产。
希诺谷团队继2016年世界首例基因编辑疾病模型犬“苹果”、2017年世界首例基因编辑克隆犬暨我国首例自主研发的体细胞克隆犬“龙龙”之后,于2018年4月成功获得我国首批试管婴儿犬,继续深入犬科领域的研究并取得重要进展,犬IVF技术是对犬基因编辑技术、犬体细胞克隆技术的有益补充,这项成果在拯救濒危犬科动物、优良犬种繁育、犬遗传疾病的治疗乃至人类疾病的研究方面,都有重要的实用价值。